核酸定量依賴于測量DNA和RNA的紫外吸收率，常見于260納米，核堿基在該處吸收力強。通過結合比爾-朗伯定律與消光系數，吸收值可以直接與核酸濃度相關。230 nm和260 nm的吸收為評估樣品純度提供了便捷的基礎，支持基因組DNA、PCR產物及其他制備核酸樣品的質量控制。與熒光染料測定結合使用，吸收度測量為定義DNA或RNA濃度提供了實用框架，以便后續應用。

比爾定律是描述物質濃度與其在已知光程距離下光吸收之間的關系的方程。

其中：

• Abs = 吸收度

• l = 光路長度：光線穿過物質的距離

• ε = 摩爾消光系數：衡量物質在特定波長下吸收光線的強度

• C = 物質濃度

我們可以用核酸濃度因子替代消光系數，因為這是另一種可用來關聯物質吸收光線能力與濃度的數值。隨后可用于核酸定量。

什么是核酸濃度因子，它們是如何確定的？

核酸濃度因子是波長特異性的轉換因子，將吸收率與不同核酸類型的濃度聯系起來，從而能夠通過紫外吸收率測量直接計算DNA或RNA濃度。

這些核酸濃度因子是通過測量特定核酸在特定路徑長度下吸收為1所需的濃度來確定的。已確定，在1厘米路徑長度下，吸收率為1（1 Abs）需要0.02 ng/μL的dsDNA濃度。

該濃度隨后可利用下方重組的比爾定律方程求得因子（F）值。該因子隨后將替換消光系數：

該因子可用于下方重新排列的比爾定律方程，求解吸收度測量的未知濃度，如DS-11系列分光光度計所示：

同樣的計算方法也用于確定其他核酸的濃度因子。DS-11還用到的其他因素如下：

ssDNA：33 ng/uL
ssRNA：40 ng/uL

這些濃度因子與其消光系數成反比。在260納米處，1A所需的核酸量越高，相應的濃度因子越低。

為什么核酸濃度因子不同？

dsDNA、ssDNA和RNA具有不同的化學和結構性質，導致光吸收行為各異。這意味著每種核酸的濃度不同，才能在260納米波長下達到1.0的吸收率。核酸的以下特性導致了消光系數和濃度因子的不同：

• dsDNA：其雙螺旋結構，鍵彼此接近，氫鍵將結構連接在一起，導致紫外線吸收率降低。

• ssDNA：其堿基暴露得更明顯，不像DSD那樣受到堿基堆疊的相互作用影響。

• RNA：核糖和額外的羥基會干擾紫外線吸收。

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核酸濃度因子為利用吸收度計算核酸濃度提供了一種簡化的方法。這些變化的數值恰當地考慮了核酸結構差異導致的光吸收模式差異。您可以通過這里的微體積核酸性能數據，了解DS-11系列分光光度計/熒光儀在寬廣范圍內實現的高精度和線性度。或者聯系咨詢！