山梨醇含量測試盒 

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

山梨醇廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，不僅是糖運輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風味密切相關。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經常需要檢測山梨醇含量變化。

測定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍色絡合物，在655nm波長有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體3.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3.5mL×1瓶 ，4℃保存。

山梨醇的提取：

按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴10分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液待測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至655nm，蒸餾水調零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻后室溫靜置15min，8000g，25℃離心10min，取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中，測655nm下吸光值A，計算ΔA=A測定管-A空白管。空白管只要做一管。

山梨醇含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.352x - 0.002；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按照樣品質量計算

山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.176x - 0.002；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按照樣品質量計算

山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意：*低檢測限為1μg/g鮮重或0.01μg /mg prot

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